研究人员利用小鼠的单倍体ES细胞(只有一个染*体组)，成功培育出转基因小鼠。其主要技术流程如图所示，请分析回答...

问题详情：

研究人员利用小鼠的单倍体ES细胞(只有一个染*体组)，成功培育出转基因小鼠。其主要技术流程如图所示，请分析回答下列问题：

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种识别序列均不相同的限制酶。箭头指向的位置为限制酶的切割位置：Ampr是氨芐青霉素抗*基因，Neor是G418抗*基因。

（1）利用PCR技术可以扩增目的基因，PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP(包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物以外，还应含有________；引物应选用下图中的________(填图中标号)。

（2）在基因工程*作步骤中，过程①②称为________。已知氨芐青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neor的小鼠细胞。结合上图推测，过程①选用的2种限制酶是________(填图中编号)，③处的培养液应添加________(填“氨芐青霉素”或“G418”)。

（3）细胞乙与________类似，图中桑椹胚需通过________技术移入*小鼠子宫内继续发育，进行该*作前需对受体小鼠进行________处理。

【回答】

Taq酶(或耐高温的DNA聚合酶)    A和D    基因表达载体的构建    Ⅰ和Ⅱ    G418    受精卵    胚胎移植    同期发情   

【解析】

PCR反应的条件：模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物、耐高温的DNA聚合酶，其中，dNTP的作用是合成DNA的原料、提供能量。

基因工程的*作步骤为：

提取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。

【详解】

（1）根据分析可知，PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP(包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物以外，还应含有耐高温的DNA聚合酶。为了扩增目的基因的片段，根据图示可知需要在引物A和D作用下以目的基因的两条链为模板合成子代目的基因。

（2）由图可知，过程①②是将目的基因和运载体连接形成重组质粒，即基因表达载体的构建过程。重组质粒上的抗生素抗*基因可作为标记基因，其作用是有利于筛选出含有目的基因的细胞。根据题意可知，氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo′的小鼠细胞，因此应选择Neo′作为标记基因，即质粒上Neo′不能用限制酶切割，则过程①应选用Ⅰ和Ⅱ两种限制酶，图中③处的培养液应添加G418以便于起到筛选的作用。

（3）处理形成的细胞乙与受精卵类似，应用早期胚胎培养技术可以使其发育成桑椹胚。再将桑椹胚通过胚胎移植技术移入*小鼠子宫内继续发育，进行该*作前需对受体小鼠进行同期发情处理，以保*供体与受体处于相同或相近的生理状态。

【点睛】

本题考查了基因工程的有关知识，要求考生能够图示和题干信息确定合适的限制酶，再结合所学知识准确答题。

知识点：DNA和蛋白质技术

题型：填空题