2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家．绿荧光蛋白能在蓝光或紫...

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2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿*荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家．绿*荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能．如图1为我国首例绿*荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：（1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制*内切酶切取目的基因、切割质粒．限制*内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制*内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点． ①如图2所，请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏*末端． ②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏*末端能否连接？理由是：．（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是．（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是．获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是，可以避免．（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝*荧光蛋白，黄*荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝*荧光蛋白过程的正确顺序是：（填序号）． ①推测蓝*荧光蛋白的氨基*序列和基因的核苷* ②蓝*荧光蛋白的功能分析和结构设计序列 ③蓝*荧光蛋白基因的修饰（合成） ④表达出蓝*荧光蛋白．

【回答】

解：（1）①限制酶识别特定的核苷*序列，并在特定的切割位点切割，产生粘*末端．限制酶Ⅰ和Ⅱ切割后产生的粘*末端相同，即均产生GATC序列，因此可以用DNA连接酶连接起来． ②在DNA连接酶的作用下，由于两种不同限制酶切割后形成的黏*末端是相同的，因此上述两种不同限制酶切割后形成的黏*末端可以连接．（2）将重组质粒导入动物细胞的方法是显微注*法．（3）标记基因是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因．（4）蛋白质工程的基本途径是：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基*序列→找到相对应的脱氧核苷*序列→相应基因的修饰改造或人工合成→相应的表达．故*为：（1）① ②可以连接因为由两种不同限制酶切割后形成的黏*末端是相同的（2）显微注*技术（3）为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因发生免疫排斥反应（4）②①③④