7.(14分)人外周血单核细胞能合成白细胞介素2(IL-2)。该蛋白为淋巴因子,可增强机体免疫功能,但在体内易...
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7.(14分)人外周血单核细胞能合成白细胞介素2(IL-2)。该蛋白为淋巴因子,可增强机体免疫功能,但在体内易被降解。研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一个融合基因,在酵母菌中表达出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2- HSA融合蛋白。技术流程如右图。请回答:
(1)从健康人外周血分离得到的单核细胞,应置于 气体环境中,并在适宜温度和pH条件下培养48h。提取细胞总RNA,生成cDNA。图中PCR过程的模板是 。
(2)表达载体1中的位点a应含有图中 酶的识别序列,才能成功构建表达载体2。
(3)表达载体2导入酵母菌后,融合基因转录出的mRNA中,与IL-2蛋白对应的碱基序列中不能含有 密码,才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白。
(4)白细胞介素在单核细胞内合成的直接模板是 ,在体液免疫过程中,白细胞介素可作用于受抗原刺激的B细胞,使B细胞增殖、分化,形成 细胞。
(5)将表达载体2导入酵母细胞,在培养液中培养一段时间后离心,取
(上清液/菌体)进行产物鉴定。
【回答】
【*】
7.(14分)
(1)95%空气和5%CO2 含有目的基因(IL-2基因)的cDNA
(2)限制酶BglⅡ
(3)终止
(4)mRNA 浆细胞和记忆细胞
(5)上清液
【解析】(1) 从健康人外周血分离得到的单核细胞,应置于95%空气和5%CO2气体环境中,并在适宜温度和pH条件下培养48h。图中PCR过程的模板是含有目的基因(IL-2基因)的cDNA。由mRNA到cDNA的过程是反转录过程。
(2)根据图解可知目的基因的两端分别是由限制酶EcoRⅠ、BglⅡ切割的,同一限制酶切割才能形成相同的黏*末端,表达载体1中具有EcoRⅠ的识别位点,因此位点a应与限制酶BglⅡ的识别位点相同,才能成功构建表达载体2。
(3)mRNA中如果含有终止密码子,则会导致翻译终止,不能合成目的蛋白。
(4) 白细胞介素在单核细胞内合成的直接模板是mRNA ,在体液免疫过程中,白细胞介素可作用于受抗原刺激的B细胞,使B细胞增殖、分化,形成浆细胞和记忆细胞。
(5)检测蛋白质,可以利用蛋白质作为抗原,导致机体产生抗体进行检测,由于抗体具有专一*,因此抗原—抗体杂交技术可以迅速检测出酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白,在培养液中培养一段时间后离心,取上清液进行产物鉴定。
知识点:生物技术的安全*和伦理问题
题型:综合题