P450是石油降解的关键酶。用SalI和NdeI联合酶切获得P450基因，与*图所示的质粒重组后，导入大肠杆菌...

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P450是石油降解的关键酶。用SalI和NdeI联合酶切获得P450基因，与*图所示的质粒重组后，导入大肠杆菌中获得基因工程菌。*图中mel基因表达能使白*菌落变成黑*，aacCI是庆大霉素（抗生素）抗*基因。*图中箭头位置是不同限制酶的切割位点，乙图表示几种限制酶对应的识别序列及切割位点。回答下列问题：

(l)*图所示质粒中没有Sal I酶的切割位点，切割质粒时可用乙图中的_____________酶代替，原因是________________。酶切后的质粒与目的基因（P450基因）在__________酶的作用下形成重组质粒。

(2)经测定图*质粒长度为7.6kb(lkb为1000个碱基对)，重组质粒经Nde I、SspI联合酶切后获得了6．0kb和1.2kb的两个片段，据此推测，目的基因的长度应为__________kb。基因表达载体中必须含有启动子，它的作用是__________________。

(3)将重组质粒导人大肠杆菌时，常用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞处于一种_____________的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。由于重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需要接种到含有________的固体培养基上，选择颜*为_____________的菌落扩大培养，进而筛选出所需的工程菌。

【回答】

 (1)XhoI  SalI和XhoI作用于原质粒所产生的粘*末端相同   DNA连接    (2)1.4   RNA聚合酶识别并结合位点 (3)能吸收周围环境中DNA分子  庆大霉素     白* 

【解析】 (l)*图所示质粒中没有SalI酶的切割位点，切割质粒时可用乙图中的Xho I酶代替，二者作用后可形成相同的黏*末端。酶切后的质粒与目的基因（P450基因）可在DNA连接酶的作用下形成重组质粒。(2)图*质粒长度为7.6kb(lkb为1000个碱基对)，据图*可知，用Xho I和NdeI联合酶切处理质粒，去除的片段应为1.8kb，剩余的DNA片段为5.8kb，重组质粒经Nde I、SspI联合酶切后获得了6．0kb和1.2kb的两个片段，说明重组质粒长度为6.0+1.2=7.2kb，则目的基因的长度应为7.2—5.8=1.4kb。基因表达载体中启动子是RNA聚合酶的结合部位，可以启动转录过程。(3)将重组质粒导人大肠杆菌时，常用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞壁的通透*增大，使之容易吸收周围环境中DNA分子。据图可知，目的基因的*入会破坏mel基因，但不会破坏庆大霉素（抗生素）抗*基因，因此可将受体细胞接种到含有庆大霉素的固体培养基上，含有重组质粒的大肠杆菌形成的菌落不会变成黑*，但具有庆大霉素抗*，选择颜*为白*的菌落扩大培养，可筛选出所需的工程菌。

知识点：生物技术的安全*和伦理问题

题型：综合题